【摘要】 目的探讨Ecadherin和Ki67在结直肠癌中的表达及意义。研究拟采用免疫组织化学SP法检测Ecadherin在正常结肠组织、结肠腺瘤组织及结直肠癌组织中的表达，并选择Ki67指数作为反映结直肠癌增殖活性的指标，旨在探讨它们的异常表达与结直肠癌分化、转移等之间的关系。
1材料和方法
1.1材料取自北京天坛医院2003~2005年间结直肠癌手术标本48例，均经病理证实。所有病例术前均未进行任何抗肿瘤治疗。常规10%中性福尔马林固定、石蜡包埋。切片厚度4μm，常规HE染色。患者年龄32～84岁，平均62.2岁。其中男28例，女20例。大体形态：隆起型19例，溃疡型29例。分化程度：高分化9例，中分化31例，低分化8例。浸润深度：浅层7例，深层41例。淋巴结转移：无淋巴结转移28例，有淋巴结转移20例。并另取结肠腺瘤组织活检标本23例及正常结肠组织(远癌端正常组织)活检标本20例作为对照。
1.2免疫组织化学染色（链霉素抗生物素蛋白－过氧化物酶法，SP法）石蜡切片常规脱蜡至水，染色方法按SP试剂盒说明书步骤进行， 0.01M枸橼酸缓冲液（pH=6.0）微波修复18分钟行抗原修复，第一抗体（鼠抗人Ecadherin、Ki67单克隆即用型抗体均购自北京中杉金桥公司）4℃过夜。经DAB显色后，苏木素复染，中性树胶封片。阴性对照采用0.01M PBS（pH＝7.4）液体代替一抗，其他步骤不变。SP及DAB试剂盒均购自北京中杉金桥公司。
1.3结果判定标准Ecadherin在正常情况下阳性染色定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色。每张切片随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个瘤细胞，计数阳性细胞百分比。无着色为（－），阳性瘤细胞数≤90％为表达降低，＞90％为表达正常。20％以上瘤细胞核和（或）浆染色为核和（或）浆表达。出现胞浆和（或）胞核表达为异位表达。异位表达和表达降低统归为异常表达[1]。Ki67主要表达于细胞核，染成黄棕色者为阳性，未被染成黄棕色者为阴性。每张切片随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，计算阳性标记细胞数的平均百分率。阳性细胞表达率≤50％者为低表达，＞50％者为高表达[2]。
1.4统计学分析采用SPSS 10.0统计分析软件进行分析，用t检验、卡方检验和确切概率法。
2结果
2.1Ecadherin和Ki67在结直肠癌、结肠腺瘤及正常结肠组织中的表达情况
表1结直肠癌中Ecadherin 和Ki67表达与临床病理指标的关系（略）
结直肠癌48例中，Ecadherin正常表达11例，异常表达37例，异常表达率为77.1％，见图1、2；结肠腺瘤25例中，Ecadherin正常表达19例，异常表达6例，异常表达率为24.0％；20例正常结肠组织中，Ecadherin正常表达19例，异常表达1例，异常表达率为5.0％。结直肠癌Ecadherin异常表达率明显高于结肠腺瘤和正常结肠组织，组间比较差异有统计学意义（Ｐ＜0.01）。Ki67阳性指数在结直肠癌、结肠腺瘤及正常结肠组织中分别为（67.60±2.52）％、（38.44±3.59）％及（8.65±1.10）％。可见，结直肠癌的Ki67阳性指数明显高于结肠腺瘤和正常结肠组织，组间两两比较差异有统计学意义（Ｐ＜0.01），见表1。经统计学分析，Ecadherin表达与浸润深度和有无淋巴转移有关（P＝0.020和P=0.013），而与患者的年龄、性别、大体形态、分化程度无关。Ki67表达与患者性别和有无淋巴转移有关（P＝0.011和P＝0.043），而与患者的年龄、大体形态、分化程度、浸润深度无关。
2.2结直肠癌中Ecadherin与Ki67表达的关系Ecadherin正常表达组和异常表达组的Ki67阳性指数分别为（67.30±18.87）％和（68.64±11.99）％。Ecadherin异常表达组Ki67阳性指数略高于正常表达组，但无统计学意义。Ecadherin与Ki67表达无关，见表2。
表2结直肠癌中Ecadherin表达与Ki67表达的关系（略）
3讨论
3.1Ecadherin在结直肠癌中的表达及意义Ecadherin是钙粘附蛋白超家族的成员之一，是最重要也是近几年研究最深入的一类钙粘附蛋白。Ecadherin被看作是上皮细胞选择性粘着剂，以维持组织结构的完整性和极性，Ecadherin表达下调或不表达是上皮细胞离散的分子基础，提示Ecadherin具有肿瘤侵袭和转移抑制功能[3,4]。目前，Ecadherin已成为研究恶性肿瘤侵袭和转移的热点之一，如膀胱癌[4]、甲状腺乳头状癌[5]等。大量的研究结果表明，Ecadherin表达下降或丧失与肿瘤低分化、高侵袭、高转移和高复发率呈正相关，是预示肿瘤进展及患者预后的指标之一。本研究结果显示，结直肠癌中Ecadherin异常表达率明显高于结肠腺瘤和正常结肠组织，组间比较差异有显著性，表明Ecadherin在结直肠癌的发生发展中起一定作用。关于Ecadherin与肿瘤分化程度、浸润深度和淋巴转移的关系的研究，结果不一致。有文献报道结直肠癌中Ecadherin的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴转移与预后密切相关，可以作为评估预后的独立因素[6,7]。也有研究认为Ecadherin表达缺失与结直肠癌浸润转移潜能并无确定关系，不能作为结直肠癌独立的预后指标[8]。本研究结果表明，Ecadherin的异常表达与患者年龄、性别、肿瘤的大体形态、分化程度、浸润深度均无关，而与有无淋巴转移有关，表明Ecadherin的表达与结直肠癌的浸润和转移有关，提示其可以作为评估结直肠癌预后的指标。造成研究结果差异的原因可能是肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的过程，有多种因素参与。而Ecadherin作为其中的因素之一，同时还必须与catenins结合后才能发挥作用，catenins异常也会影响其功能。
